超純水在LC-MS生物醫(yī)學(xué)分析中的應(yīng)用
瀏覽: 發(fā)布日期:2018-11-02
LC-MS的強大功能已經(jīng)得到了全球生物醫(yī)學(xué)實驗室的認(rèn)可。1,2現(xiàn)在的LC-MS儀器已經(jīng)從研究到常規(guī)臨床實驗室范圍廣泛使用,并有效應(yīng)用于以下領(lǐng)域:
· 治療藥物監(jiān)測 - 測量血漿,血液或組織中的藥物(例如免疫抑制劑)
· 濫用藥物測試 - 測量在尿液或唾液中的藥物(例如***,美沙酮,***,嗎啡,哌替啶,等等)
· 激素測試 - 測量血清或血漿中的激素(例如類固醇或甲狀腺激素)
· 生物胺分析 - 測量血漿或尿液中的生物胺(如兒茶酚胺)
· 新生兒篩查 - 通過使用LC-MS水平監(jiān)測氨基酸和酰基肉堿檢測嬰兒可治療的疾病
LC-MS儀器相對于其他分析工具具有很強的吸引力,原因在于該技術(shù)能夠以非常高的靈敏度同時測量多種復(fù)雜分析物。此外,速度和信任也是患者護理的關(guān)鍵因素,同時成功的LC-MS生物醫(yī)學(xué)分析具有高度靈敏度,可追溯性強和數(shù)據(jù)可靠的特性。因此,對于生物醫(yī)學(xué)用LC-MS工作流程中的試劑水及其水在LC-MS成功分析實踐中的作用將通過以下三個方面進行介紹。
靈敏度
超純水被廣泛用于LC-MS流程的各個環(huán)節(jié)(圖1),所以是導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)鬼峰,基線噪音和高MS背景等這些原因的主要污染源。同時也會使儀器或方法的靈敏度下降,使一些低濃度分析變的困難3。為了避免干擾,確保檢測到的分析物是來自樣品,而非來自實驗用水4,實驗過程需要使用高質(zhì)量的超純水,避免數(shù)據(jù)偏差和再次污染5。
Figure 1. The role of water in the LC-MS laboratory
超痕量分析是LC-MS生物醫(yī)學(xué)分析中的一個應(yīng)用領(lǐng)域,在激素檢測中,相較于其他實驗成分,其中水的使用量是非常大的。因此將Milli-Q水(電阻率18.2MΩ·cm(25℃),TOC<5ppb)作為激素中雌二醇分析的實例進行分析。這個實驗的結(jié)果如圖2所示,其中MRM色譜圖顯示Milli-Q®水中不存在雌二醇,確保了分析方法的低檢出限,使用標(biāo)準(zhǔn)加入法測得雌二醇濃度為265.40ng/L。
前體離子273m/z和碎片離子255m/z用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)ESI+轉(zhuǎn)換。HPLC和MS以及LC-MS/MS的儀器參數(shù)以及制備Milli-Q®水所用水源,見圖2。
Figure 2. MRM chromatogram (ESI+) of estradiol in a sample and in Milli-Q®water.
可追溯性
水純化系統(tǒng)的在線監(jiān)測功能使科學(xué)家們確定他們所使用的水是否符合LC-MS分析的要求。但是,當(dāng)問題產(chǎn)生時,說明LC-MS分析過程中已經(jīng)出現(xiàn)了污染,找到并消除其來源至關(guān)重要,因為污染隱患來源非常多,使用LC-MS實驗時收集記錄的水質(zhì)參數(shù)的數(shù)據(jù)可以在特定的日期與污染源聯(lián)系起來,從而促進水質(zhì)評估和問題的排查。
而且,在所有臨床實驗室中,可追溯性都是質(zhì)量管理體系中的重要需求,能使實驗室符合認(rèn)證,例如,ISO15189:2007標(biāo)準(zhǔn)或CLSI®C3—A4。所以,在這種情況下用電子方式記錄水質(zhì)參數(shù)的方法是一種確保高質(zhì)量認(rèn)證的解決方案。
可靠性
為了滿足LC-MS生物醫(yī)學(xué)實驗室的要求,水源必須可靠。所以水純化系統(tǒng)不僅要生產(chǎn)高質(zhì)量的實驗用水,而且這個質(zhì)量必須始終如一。為確保水質(zhì)的一致性,使用在線監(jiān)測工具。水中的離子含量通過電阻率測量來評估,通常電阻率18.2MΩ·cm(25℃)的水表示不含離子雜質(zhì)。
為了檢測有機污染物程度,可用可氧化總有機碳(TOC)計算;TOC低于5ppb的水(或μg/L)適用于LC-MS實驗。因此,要檢測水質(zhì)的穩(wěn)定性需要連續(xù)監(jiān)測Milli-Q®水質(zhì)的電阻率和TOC參數(shù)。圖3顯示了Milli-Q®系統(tǒng)提供的水質(zhì)穩(wěn)定性在線監(jiān)測數(shù)據(jù)。
Figure 3. Levels of Resistivity (MOhm·cm) measured continuously and TOC (ppb) measured every 3 minutes as a function of volume produced by a Milli-Q® water system. Di?erent colors refer to data obtained for three di?erent sets of consumables installed by turns.
結(jié)論
超純水適用并符合LC-MS生物醫(yī)學(xué)分析實驗的要求,而且良好的水質(zhì)對實驗的高質(zhì)量和穩(wěn)定性至關(guān)重要。臨床實驗室LC-MS實驗 可以使用Milli-Q®水凈化系統(tǒng)即能符合LC-MS儀器高靈敏度的要求還可以獲得可靠和可追溯的分析結(jié)果。